利用高效液相色谱法测定甜茶叶中甜茶苷含量方法的研究（一） 高效甜茶苷测定前处理过程中
我要评论本文建立一种采用高效液相色谱测定甜茶叶中甜茶苷含量的利用方法。依据试验结果，高效甜茶苷测定前处理过程中，液相以30%乙腈溶液为溶剂，色谱采用超声方式对甜茶叶进行处理能获得最佳的法测方法甜茶苷提取率。色谱条件：C18柱（250mm×4.6mm×5µm）；流动相：0.05%磷酸溶液-乙腈（68+32）；流速：1mL/min；检测波长：210nm；进样量：5µL；柱温：40℃；外标法定量。定甜的研在该色谱条件下，茶叶茶苷甜茶苷浓度为0mg/mL～1.5mg/mL的中甜范围内，甜茶苷峰面积（Y）与甜茶苷浓度（X）具有良好的含量线性关系，线性回归方程Y=21.0844X，利用相关系数r=1.0000；加标回收率为96.2%～102.3%；精密度（RSD）为1.23%。高效相关试验数据证明，液相该方法快速简单、色谱重复性好、法测方法准确，定甜的研适用于甜茶叶中甜茶苷含量的测定。
1引言
甜茶（RubussuavissimusS.Lee）是蔷薇科植物甜叶悬钩子属多年生有刺灌木，广西野生甜茶为多年生纯天然、原生态、无污染常绿木本植物，是广西特有的野生植物，主要生长在广西梧州、桂林及柳州等地区的。其适宜生成在亚热带气候区及海拔500-1000m的丘陵山地，由于其叶片味甜，故名甜茶。甜茶是一种低热能的天然甜味植物。野生甜茶具有相当高的营养价值，其中以广西甜茶最为代表，含有极高的甜茶苷和茶多酚外，还含有18种氨基酸及人体所必需的微量元素等成分，其中甜茶苷是一种二萜葡萄糖低热量甜料，在化学结构上与甜菊苷近似，它们均由相同的苷元组成，二者的区别仅在甜茶苷中十位碳上少接一分子葡萄糖。甜茶苷的甜度为蔗糖的300倍，而热值仅是蔗糖的5%，属高甜度、低热能的天然甜味物质。甜茶苷能激活人的胰岛素，降低血糖，有很好的保健作用，对糖尿病患者和肾病病人有一定的疗效。甜茶叶提取的甜茶苷是甜味植物中口感最佳的甜味剂，因其绿色天然，保健低热而在食品、饮料、冷食制品、调味品、医药工业、美容化妆品等各类行业中展现出良好的经济价值。
广西甜茶中甜茶苷的含量与其生长时期有关，不同生长发育阶段叶子中甜茶苷的含量有着明显的差异，嫩叶中最高，成叶次之，落叶最低；甜茶叶中甜茶苷的含量与季节也有关系，5月底较高，6月底开始上升，7月、8月达到最高，9月底开始下降，12月底降到最低值。
甜茶苷作为甜茶中最重要的功能性成分之一，其含量的测定对于甜茶叶的综合利用十分关键。
目前国标中尚无针对甜茶中甜茶苷含量测定的方法，本论文旨在建立高效液相色谱法测定甜茶中甜茶苷含量的有效准确方法，为甜茶苷的开发应用作出贡献。
2实验部分
2.1仪器及试剂
UltiMate3000高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器；分析天平：感量为0.0001g和0.00001g;KQ-300DB超声波发生器；离心机：转速≥8000r/min;XHF-D高速分散器；恒温振荡器；移液枪。
乙腈（色谱纯，赛默飞世尔）；无水乙醇、石油醚（沸点30～60°）、磷酸（分析纯，上海国药化学试剂）；实验用水为超纯水。
甜茶叶：甜茶原叶采摘自广西桂林平乐，经干燥后制得。
2.2标准溶液的制备
准确称取甜茶苷标准品20mg，用30%乙腈溶解且定容至10mL混匀，配制成2.0mg/mL的标准储备溶液。用移液器准确吸取0uL、150uL、250uL、500uL、1000uL、1500uL标准储备液后用30%乙腈溶液稀释至2mL，配制成质量浓度为0mg/mL、0.15mg/mL、0.25mg/mL、0.50mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL的标准系列工作溶液。
2.3甜茶苷样品测定的色谱条件
2.3.1色谱条件
色谱柱：C18柱（柱长250mm，内径4.6mm，粒径5µm）；流动相：0.05%磷酸溶液+乙腈（68+32）；流速：1mL/min；进样量：5µL；柱温：40℃。
2.3.2检测波长的确定
选取甜茶苷标准溶液进样，在2.3.1的色谱条件下，利用高效液相色谱仪的二极管阵列全波长紫外扫描功能扫描。
2.4色谱出峰评价
按2.3确定的色谱条件，对甜茶苷含量为0.15mg/mL、0.50mg/mL、1.50mg/mL的标准点（曲线最低浓度点、中间浓度点以及最高浓度点）进样分析，得到液相色谱图。
2.5甜茶苷测定前处理提取过程的研究
将甜茶叶经粉碎后备用。
2.5.1不同溶剂对提取对甜茶苷含量测定的影响
选取三个甜茶叶样品（称样量约为0.5g），分别选取70%乙醇、纯水以及30%乙腈作为提取溶剂，提取溶剂用量为10mL，超声提取30min，将提取液用提取溶剂定容至25mL，过滤，测定甜茶苷含量。
2.5.2不同提取方式对甜茶苷含量测定的影响
选取三个甜茶叶样品（称样量约为0.5g），按表1的四种方式进行提取，将提取液用30%乙腈定容至25mL，过滤，测定甜茶苷含量。
2.6加标回收试验
称取四份同一甜茶叶样品，其中一份作为本底，另外三份分别按照加标量为0.104g/100g、0.264g/100g、0.427g/100g进行加标，然后按照已经确定的甜茶苷测定方法进行测定，计算其回收率。
2.7精密度试验
在确定的甜茶苷含量测定条件下，对同一甜茶叶样品进行6次重复测定。利用6次测定结果的RSD对精密度进行评价。
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相关链接：甜茶苷，胰岛素，乙腈溶液
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